結直腸癌（CRC）的發生發展以 mTORC2 信號通路的持續激活為核心驅動，其介導的細胞增殖與遷移被視為惡性轉移的關鍵因素，但目前針對 mTOR 催化活性的抑制劑在臨床應用中仍存在耐藥性或反應不一，這提示復合物內部結構穩態的調節存在尚未被發現的放大機制。SLAP 蛋白作為已知的抑癌因子在 CRC 中顯著下調，且具有抑制致癌信號的潛力，但其是否以及如何通過干預 mTORC2 核心復合物的完整性來協同阻斷腫瘤進展仍屬未知。本文即在這一空白背景下，系統探討 SLAP 在結直腸癌中的抑癌作用，并重點解析其通過 UBE3C 介導 mLST8 非降解性泛素化從而瓦解 mTORC2 復合物的全新分子機制。

SLAP 促進了由 UBE3C 介導的 mLST8 賴氨酸位點（K86 和 K215）的非降解性泛素化，進而破壞了 mTORC2 復合物的結構完整性，從而抑制其促癌活性。SLAP 的差異化表達決定了結直腸癌（CRC）細胞對 mTOR 催化抑制劑（mTORCi）的應答敏感性：SLAP 低表達的腫瘤細胞對 mTORCi 表現敏感，而 SLAP 高表達的細胞則可能出現悖論式激活。

結論 1：SLAP是mTORC2 的內源性抑制蛋白并下調其信號活性

研究者首先通過質譜篩選發現 SLAP 與 mTORC2 的核心組分存在物理互作。內源性免疫共沉淀實驗證實 SLAP 能與 RICTOR 和 mTOR 結合。隨后，在 CRC 細胞系中過表達 SLAP顯著降低了 mTORC2 經典下游底物 AKT（S473）和 NDRG1（T346）的磷酸化水平，而對 mTORC1 底物影響較小。這初步證明了 SLAP 是 mTORC2 信號通路的負調控因子。

Fig1. SLAP抑癌功能由mTORC2介導

結論 2：SLAP 抑制結直腸癌的惡性表型高度依賴于 mTORC2 的存在

為了確認 SLAP 的抑癌功能是否通過 mTORC2 實現，研究者進行了功能回復實驗。結果顯示，敲低 SLAP 會顯著增強細胞的侵襲力、遷移能力和克隆形成率；然而，當同步敲低 mTORC2 的關鍵組分 RICTOR 時，由 SLAP 缺失導致的促癌效應被完全逆轉。這在邏輯上建立了 SLAP 發揮抑癌作用的必要條件：必須通過抑制 mTORC2 軸來實現。

Fig2. SLAP與mLST8結合介導其抑癌功能

結論 3：SLAP 通過直接靶向 mLST8 來干擾 mTORC2 復合物的組裝

研究者進一步探索 SLAP 如何干擾復合物的物理結構。結構域缺失實驗表明，SLAP 與 RICTOR 的結合依賴于 mLST8 作為橋梁，SLAP 直接結合的是 mLST8。功能驗證顯示，人為增加 mLST8 的表達水平可以拮抗 SLAP 的抑癌作用，并恢復被抑制的 mTORC2 信號。這鎖定并確認了 mLST8 是 SLAP 調控整個復合物穩定性的關鍵分子靶點。

Fig3. SLAP通過LST8泛素化調控mTORC2組裝

結論 4：SLAP 募集 UBE3C 介導 mLST8 非降解性泛素化調控復合物解體

在分子機制層面，研究揭示了 SLAP 并非通過降解蛋白質來起作用。實驗證明SLAP 募集了 E3 泛素連接酶 UBE3C，進而使得 mLST8 在 K86 和 K215 位點發生泛素化修飾。關鍵的生物物理分析顯示，這種泛素化修飾不會引起 mLST8 的蛋白酶體降解，而是通過空間位阻效應直接導致 mLST8 從 RICTOR/mTOR 復合物中脫離。復合物的“解體”最終關閉了信號傳導。

Fig. SLAP與UBE3C相互作用促進LST8泛素化和mTORC2抑制

研究邏輯總結：

研究首先通過Co-IP分析確立了 SLAP 與 mTORC2 復合物的特異性結合，并證明其抑癌活性高度依賴于對該信號軸的下調作用；隨后在分子水平鎖定 mLST8 為其核心調控靶點，揭示了 SLAP 通過募集 E3 泛素連接酶 UBE3C 介導 mLST8 發生非降解性泛素化修飾（K86/K215位點）的獨特機制。這一修飾導致了 mTORC2 復合物的物理結構解體而非蛋白降解，從而阻斷了促癌信號傳導。該研究不僅發現了 mTORC2 完整性的內源性調控開關，更為針對結直腸癌的精準干預提供了“破壞復合物穩定性”的全新治療策略。